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액체배양에서 평판배지에 파종하는 방법

준비물

• 배양액이 들어있는 (원심분리지용) 튜브 (기준은 1~3일 정도 배양)
• 평판배지
• 스프렛타 (평판배지 위에 물질을 넓게 번지게 하는 실험용 도구)
• 피펫 (P20), 피펫팁 (P20)
• 소독용 알코올
• 고무장갑
• 마커펜
• 실험용 티슈
• 쓰레기 봉투

작업순서

1. 고무장갑을 끼고 알코올로 소독한다. 클린벤치 안을 알코올로 닦고, 클린벤치 안에 넣는 것도 전부 알코올로 소독한다.

2. 평판배지에 물방울이 뭍어있을 경우에는설험용티슈로 깨끗이 닦아 10분 정도 건조시킨다.

3. 튜브를 왼손(오른손), 피펫(20μL)을 오른손(왼손)에 쥔다. 튜브의 뚜껑을 열고 피펫팁을 장착하여 빠지지 않도록 가볍게 끝을 누른다.
   ※ 피펫팁 끝은 작업 중 다른 부분에 닿지 않도록 한다. 혹 이물질이 닿으면 피펫팁을 바꾼다. 피펫 본체의 끝도 튜브 내면 부분에 닿지 않도록 주위한다. 피펫의 외면은 자주 알코올로 닦는다.

4. 튜브의 뚜껑을 열어 피펫으로 배양액을 평판배지 중앙에 살짝 놓는다.
   ※2일간 배양한 배양액은 20~40μL. 단, 콜로니의 출현을 빨리 확인하고 싶은 경우와, 배양액에 거의 변화가 없이 파종할 경우는 100μL로 파종한다.
   ※뚜껑은 열되 손으로 잡은 상태로 유지한다. 혹시 바닥에 내려놓을 경우에는 알코올로 내려놓는 곳의 표면을 닦거나 실험용티슈에 알코올을 적셔 그 위에 올려놓는다.

5. 튜브의 뚜껑을 닫아 피펫팁을 버린다.

6. 피펫과 튜브를 두고 스프렛타를 포장에서 꺼낸다. ※ 스프렛타가 포장 단면에 닿지 않도록 주의하면서 꺼낸다. 면이 닿았을 경우에는 파기할 것.

7. 오른손(왼손)으로 스프렛타를 가지고 평판배지에 고정하고 왼손(오른손)으로 평판배지를 회전하면서 골고루 번지게 한다. 스프렛타를 세로 방향으로 3~4번 움직여 배지 중심부분에도 골고루 번지도록 한다.

8. 뚜껑을 뒤집어, 날짜와 튜브의 번호 등 정보를 기입한다.

9. 인큐베이터의 온도를 30℃로 설정하여 배양한다.